Question

【題目】研究人員用圖1中質粒和圖2中含目的基因的片段構建重組質粒（圖中標注了相關限制酶切割位點），將重組質粒導入大腸桿菌后進行篩選及PCR鑒定。以下敘述不正確的是

A.構建重組質粒的過程應選用BclⅠ和HindⅢ兩種限制酶

B.使用DNA連接酶將酶切后的質粒和目的基因片段進行重組

C.能在添加四環素的培養基上生存一定是含有重組質粒的大腸桿菌

D.利用PCR鑒定含目的基因的大腸桿菌時應選用引物甲和引物丙

Answer 1

【答案】C

【解析】

基因工程技術的基本步驟：

1、目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。

2、基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。

3、將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法。

4、目的基因的檢測與鑒定：

（1）分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術。

（2）個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

A、選擇的限制酶應在目的基因兩端存在識別位點，但BamHⅠ可能使質粒中的兩種標記基因都破壞，因此只能選BclⅠ和HindⅢ兩種限制酶切割，A正確；

B、使用DNA連接酶將酶切后的質粒和目的基因片段進行重組，B正確；

C、能在添加四環素的培養基上生存的也可能是沒有重組目的基因的大腸桿菌，C錯誤；

D、PCR技術要求兩種引物分別和目的基因的兩條單鏈結合，沿相反的方向合成子鏈，故所用的引物組成為圖2中引物甲和引物丙，D正確。

故選C。