Question

【題目】某生物興趣小組用無菌水將葡萄皮上的微生物沖洗到無菌的錐形瓶中，然后按甲所示過程進行醋酸菌的純化培養。

回答下列問題：

（1）在菌種培養過程中，需將平板倒置，其主要目的是_________________________。在操作B后，可根據菌落特征對醋酸菌進行篩選，原理是________________________。

（2）圖甲中液體培養的目的是_________________________。

（3）圖甲中C過程采用的微生物計數方法是_________________________。經培養后菌落在平板上的分布如圖乙所示，推測接種時的操作失誤是_________________________。

（4）若測得稀釋倍數為106的培養基中的平板上，菌落數的平均值為254，則每毫升樣品中的菌株數是（涂布平板時所用稀釋液的體積為0．1mL）_____________。用該方法統計的醋酸菌數目會比活菌的實際值________（填“小”或“大”），原因是_________________________________。

Answer 1

【答案】防止培養皿蓋上的水珠落入培養基，避免培養基中的水分過快地揮發 一定的培養條件下，同種微生物表現出穩定的菌落特征 增加醋酸菌的濃度 活菌計數法（稀釋涂布平板法） 涂布不均勻 2．54×109 小 當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落

【解析】

1、微生物常見的接種的方法

①平板劃線法：將已經熔化的培養基倒入培養皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數逐漸減少，最后可能形成單個菌落。

②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過大量稀釋后，均勻涂布在培養皿表面，經培養后可形成單個菌落。

2、平板劃線的操作的基本步驟是：

（一）、右手持接種環，經火焰滅菌，待涼后，在火焰旁打開盛有菌液的試管棉塞，并將試管口過火焰，將以冷卻的接種環伸入菌液，沾取一環菌液，將試管口過火焰丙塞上棉塞。

（二）、左手斜持瓊脂平板，皿蓋打開一條縫，右手于火焰近處將接種環迅速伸入平板內，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋，接種環不應劃破培養基表面。

（三）、燒灼接種環，殺滅環上殘留菌液，待冷卻（是否冷卻，可先在培養基邊緣處試觸，若瓊脂溶化，表示未涼，稍等再試），從第一區域劃線的末端開始往第二區內劃線，重復以上操作，在第三四五區內劃線，注意不要將最后一區的劃線與第一區相連。

（四）、將平板倒置，放入培養箱中培養。

3、果酒和果醋制作過程中的相關實驗操作：

（1）材料的選擇與處理：選擇新鮮的葡萄，榨汁前先將葡萄進行沖洗，除去枝梗。

（2）滅菌：①榨汁機要清洗干凈，并晾干。②發酵裝置要清洗干凈，并用70%的酒精消毒。

（3）榨汁：將沖洗除枝梗的葡萄放入榨汁機榨取葡萄汁。

（4）發酵：①將葡萄汁裝人發酵瓶，要留要大約的空間，并封閉充氣口。②制葡萄酒的過程中，將溫度嚴格控制在18℃~25℃，時間控制在10~12d左右，可通過出料口對發酵的情況進行。及時的監測。

③制葡萄醋的過程中，將溫度嚴格控制在30℃~35℃，時間控制在前7~8d左右，并注意適時通過充氣口充氣。

（1）在菌種培養過程中，為了防止培養皿上凝結的水珠落入培養基上造成污染，避免培養基中的水分過快地揮發，一般是等待平板冷卻凝固后將平板倒置進行培養。一定的培養條件下，同種微生物表現出穩定的菌落特征，故可根據菌落特征對醋酸菌進行篩選。

（2）圖甲中液體進行擴大培養的目的是增加醋酸菌的濃度。

（3）圖甲中C過程采用的微生物計數方法是活菌計數法（稀釋涂布平板法）。經培養后菌落在平板上的分布不均勻，推測是接種時涂布不均勻造成的。

（4）若測得稀釋倍數為106的培養基中的平板上，菌落數的平均值為254，則每毫升樣品中的菌株數是254×106/0.1=2.54×109。當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，故用該方法統計的醋酸菌數目會比活菌的實際值小。