Question

【題目】回答下列（一）、（二）小題：

（一）回答以菊花莖段為材料進行組織培養的有關問題：

（1）在配制MS培養基時，通常先將各種藥品配制成濃度為配方5~10倍的__________，這樣配制的主要優點是__________（A 便于低溫保存 B 延長使用時間 C 降低稱量誤差 D 減少雜菌污染）。從培養基的作用看，在MS培養基中定量添加BA和NAA后的培養基屬于___________培養基。

（2）從自然界中獲取的菊花莖段，須先用70%乙醇等進行消毒，最后用__________進行清洗。將莖段插入培養基的過程須在______中的酒精燈火焰旁進行，以保證無菌環境。

（3）從帶芽的莖段上長出叢狀苗____________（填“需要”或“不需要”）經歷脫分化，長出的叢狀苗需__________后，再轉入培養基中繼續培養。

（4）實驗中選用BA和NAA而不用植物中存在的天然激素的原因是_____________________。

（二）腺病毒能引起人呼吸系統不適等癥狀，但致死率低。研究發現該病毒可作為基因工程的載體。陳薇等科學家研發了以人5型腺病毒（Ad5）為載體的重組新冠疫苗，這是國內第一個進入臨床試驗階段的新冠疫苗。腺病毒載體疫苗生產過程示意圖如下：

回答下列問題：

（1）在制備人腎上皮細胞系（293細胞）時，發現培養一段時間，細胞鋪滿培養瓶后不再分裂，這種現象稱為__________。出現此現象后，需用__________處理，得到細胞懸液，再進行__________培養，以獲得更多的293細胞。

（2）新冠病毒為RNA病毒，其遺傳物質不能直接拼接到質粒上，因此在制備以上疫苗時需先通過___________過程獲得相應的DNA。構建重組腺病毒穿梭質粒，可使用雙酶切法，使之產生__________的粘性末端，以提高目的基因與質粒重組的成功率。據圖可知需將___________導入293細胞，從而獲得轉基因腺病毒。

（3）檢測轉基因腺病毒攜帶的目的基因是否在人體細胞內表達，可檢測細胞內是否含有相應的__________或抗原分子，若檢測抗原分子可用__________技術獲得特異性探針。

Answer 1

【答案】母液 C 發芽（生芽） 無菌水 超凈臺 不需要 分株 BA和NAA是人工合成激素，植物沒有相關分解酶，作用時間長，效果明顯 接觸抑制 胰蛋白酶 傳代 逆轉錄 不同 重組腺病毒穿梭質粒和輔助質粒 mRNA 單克隆抗體制備

【解析】

1、植物組織培養的過程：離體的植物組織、器官或細胞（外植體）脫分化形成愈傷組織，再分化形成胚狀體，最后長出完整植株（新植體）。

2、植物組織培養的條件：①細胞離體和適宜的外界條件（如適宜溫度、適時的光照、pH和無菌環境等）；②一定的營養（無機、有機成分）和植物激素（生長素和細胞分裂素）。決定植物脫分化和再分化的關鍵因素是植物激素的種類和比例，特別是生長素和細胞分裂素的協同作用在組織培養過程中非常重要，被稱為“激素杠桿”。

3、動物細胞培養的過程：取動物組織塊→剪碎組織→用胰蛋白酶處理分散成單個細胞→制成細胞懸液→轉入培養液中（原代培養）→放入二氧化碳培養箱培養→貼滿瓶壁的細胞用酶分散為單個細胞，制成細胞懸液→轉入培養液（傳代培養）→放入二氧化碳培養箱培養。

4、基因工程技術的基本步驟：（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成；（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等；（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法；（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（一）（1）MS培養基由大量元素、微量元素和有機成分組成，也可將大量元素、微量元素和有機成分分別配制成濃度為配方的5~10倍的母液，用時稀釋，這樣配制的主要優點是降低稱量誤差（即C）。MS培養基中定量添加BA和NAA后的培養基屬于發芽培養基，MS培養基中定量添加NAA后的培養基屬于生根培養基。

（2）從自然界中獲取的菊花莖段，須先用70%乙醇等進行消毒，再放入5%次氯酸鈉溶液浸泡，然后用另一5%次氯酸鈉溶液浸泡，最后在超凈臺中用無菌水清洗，將莖的切斷培養在生芽培養基中。

（3）從帶芽的莖段上長出叢狀苗不需要經歷脫分化，長出的叢狀苗需要分株后，再轉入生根培養基中繼續培養。

（4）實驗中使用的是人工合成的BA和NAA，是由于植物沒有相關分解酶，作用時間長，效果明顯。

（二）（1）細胞鋪滿瓶壁時，會出現接觸抑制現象，此時需要胰蛋白酶處理，得到細胞懸液，再進行傳代培養，已獲得更多的細胞。

（2）新冠病毒是單鏈的RNA病毒，而質粒是雙鏈的DNA，因此需要將RNA通過逆轉錄得到相應的DNA才能拼接到質粒上。構建重組腺病毒穿梭質粒，使用雙酶切法產生不同的粘性末端，這樣可以避免目的基因和質粒自身連接以及目的基因和質粒反向連接，提高目的基因與質粒重組的成功率。據圖可知需將重組腺病毒穿梭質粒和輔助質粒導入受體細胞293細胞內。

（3）基因的表達包括轉錄和翻譯兩個過程，因此檢測目的基因是否在人體細胞內表達，可檢測細胞內是否含有相應的mRNA或抗原分子，檢測抗原分子的方法是抗原-抗體雜交法，可用單克隆抗體制備技術獲得特異性探針。